第(2/3)页

    ?我们首先将    nsclc    患者分为i级至iii级和i级至iv级的不同亚组，如补充图2a-f所示，在相同病理分级下，低表达    hlf    的    nsclc    患者的无进展生存期较高表达    hlf    的患者短。相应的，根据多个独立数据集，包括我们的样本(补充图2g和h)，tcga（补充图2i和j），ae-meta(补充图2k和l)和k-m    plotter(补充图2m?o)，在相同临床阶段的    nsclc    患者中也有类似的发现。

    ?综上所述，我们的研究结果表明，低表达    hlf    与    nsclc    患者的早期进展和晚期临床病理特征显著正相关。

    图片

    ?进一步研究发现，在    nsclc    患者中，hlf    下调与较短的局部无复发生存期和远处无转移生存期呈正相关(补充图3a-d)。同样，低表达    hlf    的    adc    患者以及    sqc    患者(补充图3i-l)的局部无复发生存期和远处无转移生存期较差(补充图3e-h)。以上结果说明，低表达hlf促进nsclc早期局部复发和多器官远处转移。

    图片

    ?为了进一步确定    hlf    在    nsclc    细胞局部肺定植和远处转移中的作用，首先在多个不同亚型的    nsclc    细胞株中检测了    hlf    的表达。

    ?如补充图4a和b所示，与非癌永生化肺支气管上皮细胞    beas-2b    和正常肺成纤维细胞    wi-38相比，nsclc    细胞中    hlf    的    mrna    和蛋白质水平差异下调。我们进一步构建了    hlf    过表达的    nci-h1975(h1975)和    nci-h520(h520)肺癌细胞，这些细胞表达所有    nsclc    细胞系中hlf水平最低，并内源性下调    nci-h460(h460)和    nci-h1299(h1299)细胞    hlf    的表达，这两种细胞均表达最高的内源性    hlf    水平(补充图4c和d）。

    图片

    ?采用小鼠尾静脉模型研究nsclc细胞的肺定植和生长能力。如图3a-d和补充图4e，上调    hlf    显著抑制    h1975    细胞在肺中的肿瘤发生，表现为肺结节的形成减少，每m㎡的癌细胞数量减少，累积生存率延长。相反，沉默    hlf    对    h460    细胞有相反的效果(图3a-c、e和补充图4e)。

    ?值得注意的是，hlf    表达的改变不仅影响大肺结节的形成(在分析的肿瘤切片中定义为>50肿瘤细胞)(图3b)，但也影响小肺结节的形成(在分析的肿瘤切片中定义为5-50个肿瘤细胞)(补充图4e)，这支持了    hlf    在肿瘤细胞的早期定植和随后的肺内生长中都起着重要作用的观点。

    ?最后，与实验结束时相比，在注射    hlf    稳定过表达的    h1975    细胞和下调    h460    细胞的小鼠肿瘤组织中，进一步证实了相应的高和低表达水平(补充图4f)。

    图片

    ?然后，采用体内左心室接种小鼠模型检测    hlf    对    nsclc    远处转移能力的影响，将载体/nci-h1975、hlf    过表达    nci-h1975、载体/nci-h460    和    hlfsh#1/nci-h460    细胞接种到小鼠左心室。

    ?接种细胞6周后，收集小鼠的胫骨、脑、肝组织，并进行    h&e    染色处理。如图所示。图3f-i和补充图4g，我们在与载体组相比，过    hlf    表达小鼠组中，包括骨、大脑和肝脏等远处器官检测到较少的转移性肿瘤，以及较长的累积存活期延长。

    ?相比之下，沉默hlf可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期(图3f-i和补充图4h)。

    ?因此，这些结果表明，低表达    hlf    的    nsclc    细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。

    图片

    ?我们利用cck-8、集落形成和an连接素凋亡进一步研究了    hlf    在    nsclc    中的生物学功能，发现在正常培养条件下，hlf    对    nsclc    细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响(补充图5a–c)。

    ?我们的结果显示，上调    hlf    会增加培养液的ph水平，而沉默    hlf    会降低培养基的ph水平，但正常情况下    hlf    并不影响    nsclc    细胞的表型和数量(补充图5d)。

    ?低表达    hlf    可能通过营养代谢途径促进    nsclc    细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。

    图片
    第(2/3)页